Associação Portuguesa de Investigação em Cancro
Nano fabricação 3D para microscopia single-molecule
Nano fabricação 3D para microscopia single-molecule
A nova técnica de focagem envolve o crescimento de células em lamelas de vidro com partículas nanométricas, especialmente impressas em 3D, chamadas "fiduciais". Estas atuam como marcadores de referência para a estabilização ou bloqueio do microscópio, enquanto ocorre uma gravação das células. O controlo e posicionamento destes marcadores de guia em nanoescala, na arquitetura 3D, permite um maior controlo da imagem.
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Abstract:
Two-photon direct laser writing is an additive fabrication process that utilizes two-photon absorption of tightly focused femtosecond laser pulses to implement spatially controlled polymerization of a liquid-phase photoresist. Two-photon direct laser writing is capable of nanofabricating arbitrary three-dimensional structures with nanometer accuracy. Here, we explore direct laser writing for high-resolution optical microscopy by fabricating unique 3D optical fiducials for single-molecule tracking and 3D single-molecule localization microscopy. By having control over the position and three-dimensional architecture of the fiducials, we improve axial discrimination and demonstrate isotropic subnanometer 3D focusing (<0.8 nm) over tens of micrometers using a standard inverted microscope. We perform 3D single-molecule acquisitions over cellular volumes, unsupervised data acquisition and live-cell single-particle tracking with nanometer accuracy.
Revista: Nature Communications